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Clinica Chimica Acta:利用改進的野生型阻斷劑可在單管中敏感、選擇性地檢測密碼子12和13 KRAS突變

2019-9-13 作者:gladiator   來源:MedSci原創 我要評論0
Tags: KRAS  突變  

據推測,在WTB-PCR系統中,與DNA聚合酶的熱力學驅動力相關的較多循環導致在擴增子中人工引入突變核苷酸。在目前的研究中,科學家開發了通用的WTB-PCR以克服這些限制,其中使用了兩種策略:在WTB寡核苷酸的5'-末端堿基處進行硫代磷酸酯修飾,以及引用的內部陽性控制劑(RIPC)片段的擴增。結果表明,通用WTB-PCR可以檢測具有更高選擇性(即0.01%)的單拷貝KRAS突變體等位基因,并且具有更高的消除KRAS野生型等位基因的非特異性擴增的能力。此外,引入的內部陽性對照(RIPC)片段的引入防止了由樣品DNA的量不足引起的假陰性結果,并允許定量分析每個FFPE樣品中的突變水平。在來自mCRC患者的50FFPE組織切片樣品??臨床應用中,70%(35/50)KRAS基因編碼子1213發生了不同的突變;而采用傳統PCR方法,在不添加WTB寡核苷酸的情況下,可檢出30%0(15/50)。總之,WTB-PCR是一種快速、簡便、廉價的檢測mCRC患者低豐度KRAS突變的方法。

原始出處:

Ning SuKun WeiSensitive and selective detections of codon 12 and 13 KRAS mutations in a single tube using modified wild-type blocker

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